一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送
1.    采集指征：（1）有典型的尿路感染癥狀；(2）肉眼膿尿或血尿；（3）尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽性；(4)不明原因的發(fā)熱，無其他局部癥狀；（5）留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；（6）膀胱排空功能受損；(7）泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前。
2.    采集方法：標(biāo)本采集應(yīng)力爭在未使用抗生素之前．注意避免消毒劑污染標(biāo)本，方法有：(1）清潔中段尿：最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本，囑咐患者睡前少飲水，清晨起床后用肥皂水清洗會(huì)陰部，女性應(yīng)用手分開大****，男性應(yīng)翻上包皮．仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排去，中段尿約10-20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡單、易行，是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法，但很容易受到會(huì)陰部細(xì)菌污染，應(yīng)由醫(yī)護(hù)人員采集或在醫(yī)護(hù)人員指導(dǎo)下由患者正確留取。（2）恥骨上膀胱穿刺：使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，但有一定的痛苦．患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。(3）直接導(dǎo)尿：按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰局部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插人膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。（4）小兒收集包：對(duì)于無自控能力的小兒可應(yīng)用收集包收集尿液，這種裝置由于很難避免會(huì)陰部菌群污染產(chǎn)生假陽性，所以只有在檢驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)才有意義。如果檢驗(yàn)結(jié)果為陽性，應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行分析，必要時(shí)可使用恥骨上膀胱穿刺或?qū)蚍羧∧蛞哼M(jìn)行復(fù)檢。（5）留置導(dǎo)尿管收集尿液：利用留置導(dǎo)尿管采集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)先消毒導(dǎo)尿管外部，按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液，操作時(shí)應(yīng)防止混入消毒劑，注意不能從尿液收集袋中采集尿液。
3.    采集容器：（l）應(yīng)由不與尿液成分發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成；(2）潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏；(3）不含防腐劑和抑菌劑；(4）廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)＞50ml、盒蓋易于開啟。
4.    標(biāo)本運(yùn)送：標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不得超過2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存）,4℃ 冷藏保存時(shí)間不得超過8h，但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。

標(biāo)本驗(yàn)收
1．申請單驗(yàn)收：要求尿培養(yǎng)申請單除患者的基本信息以外還應(yīng)包括標(biāo)本收集時(shí)間、收集方式、是否已使用抗生素等，驗(yàn)收時(shí)應(yīng)檢查申請單是否填寫完整。
2．標(biāo)本驗(yàn)收：(l）檢查標(biāo)本標(biāo)識(shí)是否與申請單相符；(2) 檢查標(biāo)本容器有無溢漏、滲出，是否加蓋；(3）檢查送檢時(shí)間是否超過規(guī)定的標(biāo)本保存時(shí)間。
3．不合格標(biāo)本處理：(1）對(duì)申請單信息不全者應(yīng)設(shè)法與臨床醫(yī)師取得聯(lián)系；(2）對(duì)標(biāo)識(shí)不符、送檢容器不合格，送檢時(shí)間超過規(guī)定時(shí)間的標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，要求重新留取標(biāo)本，并做記錄。

二、實(shí)驗(yàn)室檢查

1．涂片檢查：尿路感染標(biāo)本可直接做細(xì)菌培養(yǎng)，無需常規(guī)進(jìn)行涂片檢查。對(duì)于臨床懷疑淋病奈瑟菌、假絲酵母菌或結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本可用無菌吸管吸取尿液5-10ml置無菌試管中，3000-4000r/min離心30min，傾去上清液，取沉渣涂片，行革蘭染色或抗酸染色后鏡檢。

2．細(xì)菌培養(yǎng)：(l）普通培養(yǎng)：將收集標(biāo)本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)分別取尿液lul涂抹接種血平板和麥康凱平板（或中國藍(lán)平板），35-37℃培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果。對(duì)導(dǎo)尿、恥骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治療的患者標(biāo)本應(yīng)增加一個(gè)10ul接種量。（2）特殊培養(yǎng)：對(duì)懷疑有苛養(yǎng)菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺或?qū)蚍ú杉瘶颖荆臃N一塊巧克力平板，置5%CO₂環(huán)境中培養(yǎng)48h。檢查淋病奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)無需做定量培養(yǎng)，可將標(biāo)本離心后取尿沉渣進(jìn)行培養(yǎng)，以提高陽性率。（3）普通培養(yǎng)18-24h無細(xì)菌生長時(shí)，應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。

 

1. 結(jié)果觀察和評(píng)價(jià)：(l)菌落計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，采用1ul接種量者，將菌落數(shù)乘以10³；采用10ul接種量者，將平板菌落數(shù)乘以10²，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml）。如菌落生長過多無法精確計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告＞10⁵CFU /ml。（2）結(jié)果評(píng)價(jià)：正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染，而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對(duì)不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評(píng)價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)＞10⁵ CFU/ml可能為感染；<5×10⁴CFU/ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)估。

2．陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：培養(yǎng)48h無菌落生長，即為陰性。接種lul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)＜10³CFU/ ml”；接種10ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)＜10²CFU/ml”。

3. 陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：無意義的陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告；純培養(yǎng)報(bào)告“革蘭×性×菌生長，菌落計(jì)數(shù)：××CFU/ml”；混合菌生長報(bào)告“革蘭×性×菌和革蘭×性×菌混合生長”。有意義的陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：報(bào)告菌落計(jì)數(shù)、細(xì)菌種屬名稱及標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。


 

附錄
1. 關(guān)于尿培養(yǎng)標(biāo)本的接種：由于自然排尿收集的標(biāo)本很難避免會(huì)陰部及下尿道細(xì)菌污染，所以需要定量接種、合理評(píng)價(jià)才能判斷培養(yǎng)的細(xì)菌是否與尿路感染有關(guān)。定量接種的方法有直接劃線法和傾注平板法兩種，后者由于操作步驟繁瑣，已幾乎不被臨床實(shí)驗(yàn)室使用。直接劃線接種法的關(guān)鍵是應(yīng)保證接種量的準(zhǔn)確性，可使用1ul或10ul的定量接種環(huán)，方法是將接種環(huán)校準(zhǔn)后，以垂直方向持拿，使環(huán)圈剛好浸人尿液表面（不可使尿液碰到環(huán)上方的環(huán)柄），取尿液進(jìn)行接種。無定量接種環(huán)的實(shí)驗(yàn)室，可使用無菌的5ul微量移液器吸取尿液加人平板，再用接種環(huán)劃線接種，將平板菌落數(shù)乘以200，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU /ml）。

2．關(guān)于尿培養(yǎng)檢驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇：沒有一種平板可以適合所有尿道病原體的生長，所以應(yīng)該根據(jù)標(biāo)本來源及臨床對(duì)目標(biāo)菌的要求選擇適合的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。普通培養(yǎng)推薦使用血平板和麥康凱（或中國藍(lán)）平板，不能以血平板代替麥康凱或中國藍(lán)平板。
3. 關(guān)于尿培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)：菌落計(jì)數(shù)＞10⁵CFU/ml時(shí)只是判診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過松，將會(huì)造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過嚴(yán)，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)師密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對(duì)菌落數(shù)＜5×10⁴CFU/ml，“規(guī)范”中認(rèn)為無意義的陽性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)很據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)師聯(lián)系后，決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。以下因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)予以注意：(l)使用抗生素治療，細(xì)菌生長受到抑制；(2)尿液稀釋，尿比重＜1.003，營養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長遲緩；(3)尿pH <5.0或＞8.5，細(xì)菌生長受阻；(4)尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；(5)尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)減少；(6)不同種類的細(xì)、生長速度不同、營養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同，有文獻(xiàn)推薦：革蘭陰性菌以菌落計(jì)數(shù)＞10⁵CFU/ml，而革蘭陽性菌以菌落計(jì)數(shù)＞10⁴CFU/ml為診斷尿路感染的標(biāo)準(zhǔn)。

4. 尿培養(yǎng)檢驗(yàn)中常見的錯(cuò)誤：(l)將尿液標(biāo)本接種于增菌液中；(2)將中段尿標(biāo)本離心后取沉渣進(jìn)行一般細(xì)菌培養(yǎng)；(3)標(biāo)本保存時(shí)間超時(shí)，細(xì)菌大量繁殖；(4)直接用導(dǎo)尿管頭劃線培養(yǎng)；(5)使用中段尿標(biāo)本做厭氧菌培養(yǎng)。

顧問：王金良  組長：童明慶  副組長：倪安平 劉建棟

成員（按姓氏筆畫為序）：馬筱玲 王樹琴 徐英春 倪語星 孫自墉 李桂琴 任健康 鄒偉民 谷海瀛張遠(yuǎn)春 桂炳東

（馬筱玲李桂琴執(zhí)筆）